Clostridium butyricumのボツリヌスE型毒素遺伝子の検出

供試菌株

NBRCで保有するClostridium butyricum 3株（NBRC 3315, NBRC 3858, NBRC 13949）

方法

1. １．各菌株指定の液体培地（807培地）で4日間培養
2. ２．DNAを抽出
3. ３．ボツリヌスE型毒素遺伝子検出用のプライマーセットを用いて、供試菌株のDNA、対応するポジティブコントロール・テンプレート、およびネガティブコントロールとして滅菌水を鋳型としてPCR反応（PCR条件は製品添付の説明書に従っています）
4. ４．3%アガロースゲルで電気泳動後、エチジウムブロマイドで染色

PCR法に用いたプライマーセットおよびポジティブコントロール・テンプレート

特殊細菌検出用プライマーセット（タカラバイオ株式会社）
・ボツリヌスE型毒素遺伝子検出用Primer set BES-1&2（製品コード：S025）

特殊細菌検出用ポジティブコントロール・テンプレート（タカラバイオ株式会社）
・BS3（製品コード：S044）

結果

ボツリヌスE型毒素遺伝子検出用Primer set BES-1&2で得られる増幅産物は266bpで、試験したNBRC株3株では増幅産物は得られず、E型毒素遺伝子は保持していないことを確認しました。

M	マーカー
1	NBRC 3315
2	NBRC 3858
3	NBRC 13949
P	ポジティブコントロール
N	ネガティブコントロール

ポジティブコントロールのPCR増幅産物は、万が一、コントロールにサンプルが混入しても区別することができるように、各毒素遺伝子の増幅産物とはサイズが異なります（691bp）。
　試験は2回行い、同一の結果を得ています。
　さらに、全ゲノム塩基配列解析によってもボツリヌスE型毒素遺伝子を保持していないことを確認しました。

【参考文献】
(1) 小熊ら (1993)　蛋白質核酸酵素，Vol. 37, No. 16, 3060-3072.
(2) Huston et al. (1993)　FEMS Microbiology Letters, 108, 103-110.

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